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本试剂盒用于快速从各种常见的细菌中提取总RNA，既可用于革氏阴性细菌，也可用于革氏阳性细菌，得到的RNA可用于后续RT-PCR、Northern Blot、芯片分析、体外翻译、polyA筛选和RNase保护分析等试验。

• 操作简单快速，一般只需30～40分钟完成。
  
• 所RNA纯度高，OD260/OD280一般在2.0左右。
  
• 一般不含基因DNA和蛋白质污染。

• 试验所用的实验室环境、耗材等均需要RNase-free。
  
• 操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取。
  
• 本制品只能用于科研。

• 新鲜配制溶菌酶溶液：根据样品数量用自备的TE缓冲液和本试剂盒提供的溶菌酶干粉配制合适体积的、浓度为4mg/mL的溶菌酶溶液，放冰上待用。一次革氏阳性细菌RNA小量提取需要100μL溶菌酶溶液，一次革氏阴性细菌RNA小量提取需要10μL溶菌酶溶液。未用完的溶菌酶溶液不建议保存后重复使用。
  
• 在1.5mL塑料离心管中离心收集0.2～1.5mL新鲜细菌（细菌总数不得超过10⁹个细菌）。
  
  • 由于细菌RNA半衰期十分短，只有2～5分钟，所以必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌才能提到高质量的RNA。细菌必须立即使用，不能静置。
• 吸尽液体培养基，如果是革氏阳性细菌，则加入100μL第1步制备的4mg/mL的溶菌酶溶液，彻底重悬细菌，常温放置5～10分钟。如果是革氏阴性细菌，则加入90μL TE缓冲液和10μL第1步制备的4mg/mL的溶菌酶溶液，彻底重悬细菌，常温放置3～5分钟。
  
• 加入0.3mL细菌RNA纯化溶液A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。此时裂解物总体积是0.4mL。
  
• 加入约0.2倍体积的自备氯仿(10.4mL裂解物需0.1mL氯仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
  
• 12000～15000×g室温离心3分钟。
  
• 将上清液（约0.3mL）转移到新的离心管中。
  
  • 离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。
• 加入等体积（约0.3mL）的细菌RNA纯化溶液B，充分混匀后全部上柱。
  
• 12000～15000×g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
  
• 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
  
  • 一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复此步一次。
• 室温12000～15000×g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
  
• 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free收集管中，加入30～100μL RNA洗脱液，室温放置两分钟。
  
• 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

• RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。
  
• RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
  
• RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。